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组织芯片制备

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组织芯片免疫组化方法流程和注意事项

2020-06-22

组织芯片(tissue chip)又称组织微阵列(tissue microarray,TMA),是自蛋白质芯片、基因芯片之后出现的又一种重要的生物芯片。组织芯片是一种将数十至上千个小组织整齐地排列在一张载玻片上而制成的组织切片,主要用于研究同一种基因或蛋白质分子在不同细胞或组织中表达的情况。组织芯片的出现,与基因芯片配合使用在寻找疾病基因中有很好的互补作用。在肿瘤研究中发挥着重要作用。将基因芯片筛选出的基因作成探针,再将探针与组织芯片中众多的肿瘤组织进行荧光原位杂交,寻找肿瘤发生发展的相关因素。


免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。


根据标记物的不同,免疫组化方法分为:免疫酶法、免疫荧光法、亲和组织化学法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。其中前三种最常用。


人多种实体瘤肿瘤组织芯片在免疫组化染色过程中无组织脱落,不同分化程度的腺癌和鳞癌组织不等量和不同强度的表达细胞角蛋白CK,肝癌及癌旁组织、小细胞癌均呈CK阴性反应。所有组织的间质细胞表达波形蛋白Vimentin;所有组织中的血管平滑肌细胞、消化道平滑肌及子宫平滑肌瘤细胞表达SMA。免疫组化染色阳性信号清晰,组织背景干净。另外,在组织芯片免疫组化染色过程中我们注意到在芯片边缘的组织片的试剂覆盖欠佳,在镜检中相应区域内组织的免疫组化染色多呈阴性结果。


组织芯片



最简单的组织芯片免疫组化流程步骤



1.石蜡切片置于67℃烘箱中,烘片2小时,脱蜡至水,用pH7.4的PBS冲洗三次,每次3分钟(3×3’)。

 

2.取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液,加入微波盒中,微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档微波处理10分钟,取出微波盒流水自然泠却,从缓冲液中取出玻片,先用蒸馏水冲洗两次,之后用PBS冲洗2×3’。(注:不是所有的抗体都需要微波修复的,视具体情况而定)

 

3.每张切片加1滴3%H2O2,室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3×3’。


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